Методы диагностики вирусов

В связи с особенностью биологических свойств вирусов (в частности, обязательный внутриклеточный паразитизм) их верификация путем выделения возбудителя от больного является сложной, трудоемкой и дорогостоящей. Сравнительно редко используется в практической медицине выделение, культивирование и идентификация вирусов в клеточных культурах и куриных эмбрионах (клещевой энцефалит, полиомиелит и др.). Более широко применяются методы обнаружения вирусных антигенов, например, методом иммунофлюоресценции. Этот метод относится к экспресс диагностике, что повышает его ценность. Он основан на специфическом свечении комплекса антиген-антитело и позволяет получить ответ через несколько минут после обработки препарата из исследуемого материала специфической флюоресцирующей сывороткой. Для ранней диагностики гриппа исследуемый материал берется из носа в первые дни болезни. Приготовленные мазки-отпечатки носовой слизи обрабатывают специфическими флюоресцирующими сыворотками. Образующийся комплекс антиген-антитело ярко светится в ядре и цитоплазме клеток цилиндрического эпителия и отчетливо виден в люминесцентном микроскопе. Этим методом можно обнаружить вирус кори в носовой слизи, мокроте, ликворе. При бешенстве возможно обнаружение вируса в отпечатках с поверхности роговой оболочки глаза. При гибели больных диагноз бешенства подтверждается при исследовании аммонового рога (гистологически и иммунофлюоресцентным методом), в котором обнаруживаются тельца Бабеша—Негри.

Тельца Бабеша—Негри представляют собой сочетания скоплений вирионов с продуктами реакции клеток. Они имеют сферическую форму, размер от 1 до 25 мкм, резко отграничены от прилежащей цитоплазмы.

Антигены вирусов диагностируются также методом иммуноферментного анализа (например, антигены вируса гепатита В). Следует отметить, что не всегда обнаружение вируса или его антигенов является абсолютным диагностическим критерием. Так, при энтеровирусных инфекциях выделение вирусов из фекалий еще не доказывает наличие энтеровирусного заболевания в связи с широким распространением колонизации вирусами слизистой оболочки кишечника у здоровых людей В связи с этим диагноз верифицируется лишь при наличии диагностического нарастания титров специфических антител в крови у больного. Вместе с тем, выявление вирусов в спинномозговой жидкости позволяет диагностировать энгеровирусную природу серозного менингита. Сравнительно редко для диагностики вирусных инфекций используется биологическая проба, например, для диагностики ящура — биопроба на морских свинках.

Наиболее доступными для практической медицины остаются методы серологической диагностики вирусов. В их основе лежит взаимодействие антиген-антитело. В сыворотке крови инфицированного организма находятся антитела, относящиеся к различным классам иммуноглобулинов Для диагностики вирусных инфекций в качестве антигена применяют аллантоисную, амниотическую жидкость, суспензию хориоаллантоисных оболочек и желточных мешков куриных эмбрионов, жидкую фракцию и клетки тканевых культур, суспензии из органов животных, зараженных определенными вирусами и др. Достоверные результаты серологической диагностики получают при изучении «парных» сывороток крови больных, взятых в первые дни болезни и через 7—10 дней (время выработки специфических антител в большинстве случаев). Диагностическим считают повышение титра антител во второй сыворотке в четыре и более раз.

В последнее время наиболее часто применяется метод твердофазового иммуноферментного анализа, который позволяет определять специфические антитела классов IgM и IgG, причем метод отличают высокая специфичность, простота и доступность. При необходимости этим методом можно оценить количественные характеристики антител. Метод иммуноферментного анализа является основным для выявления общих антител к возбудителю ВИЧ-инфекции.

При получении положительных результатов применяется дополнительный, более специфичный метод диагностированя вирусов— иммунного блотинга, позволяющий выделить антитела к отдельным белкам ретро- вируса.

Широкое распространение вирусных инфекций сегодня и перспективы будущего диктуют настоятельную необходимость разработки новых методов диагностики. На основании достижений молекулярной биологии разработаны принципиально новые методы верификации вирусных инфекций, такие, как ДНК-ДНК-гибридизация и/или полимеразная цепная реакция (амплификация). Эти методы отличаются исключительной чувствительностью и, что особенно ценно, уже нашли применение в медицинской практике (диагностика вирусных гепатитов, ЦМВИ и др. ). Суть метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) заключается в воспроизведении репликации вируса in vitro. В субстрат (кровь, ткани) вводят так называемый праймер — небольшую цепочку нуклеотидов искомого вируса При его наличии в субстрате вирусная ДНК-полимераза с двух сторон «до- шнуровывает» цепочку нуклеотидов до полных размеров Такой метод амплификации (умножения) позволяет получить неограниченное количество копий вируса: до 100 млн за один день. С помощью ПЦР удается улавливать присутствие минимального количества вируса, вплоть до одной молекулы Открытие ПЦР, сделавшей возможным индикацию ДНК (РНК) разных вирусов в практической работе, было удостоено Нобелевской премии (Mullis К., 1993).